猪流行性腹泻病毒Nsp7的亚细胞定位和对Ⅰ型干扰素应答的影响

来源：畜牧兽医学报杂志2017年第3期北京时间：

作者：李红杰，王晓雪，高冬生，黄慧敏，陈陆，常洪涛，王川庆，李永涛，赵军

单位：(河南农业大学牧医工程学院，郑州 450002)

摘要：为研究猪流行性腹泻病毒（PEDV）非结构蛋白7（nonstructural protein 7，Nsp7）的亚细胞定位和对细胞Ⅰ型干扰素（IFN）应答的影响，本试验利用生物信息学预测Nsp7基因序列，克隆了PEDV中国流行毒株Nsp7基因并构建真核表达载体pCAGGS-Nsp7；采用Western blot和间接免疫荧光试验检测Nsp7在细胞中的表达和分布；通过报告基因法、ELISA以及病毒复制抑制试验评估Nsp7对Ⅰ型IFN应答的影响。基因克隆和序列分析结果显示PEDV Nsp7基因大小为249 bp，在不同PEDV毒株间高度保守；Western blot结果显示，Nsp7能够在转染细胞中高效表达；间接免疫荧光试验显示Nsp7主要定位在细胞质，仅少量分布在细胞核；双荧光报告基因试验表明Nsp7能显著抑制IFN-β启动子活性，ELISA结果显示Nsp7能显著抑制IFN-β蛋白的表达，同时水疱性口炎病毒复制抑制试验显示Nsp7明显抑制poly(I:C)介导的Ⅰ型IFN的抗病毒作用。结果提示，Nsp7作为PEDV的保守蛋白，具有拮抗Ⅰ型IFN应答的功能，为探讨和揭示PEDV逃逸宿主天然免疫应答的机制及指导临床疫苗使用奠定基础。

关键词：

基金资助：河南省高校创新团队支持计划（14IRTSTHN015）；河南省高等学校重点科研项目（16A230002）