绵羊NYD-SP27基因在BHK-21细胞中的稳定表达及其特征鉴定

来源：畜牧兽医学报杂志2017年第4期北京时间：

作者：马亚茹, 胡广东, 王红红, 加米拉, 徐锦凤, 陈创夫, 赛务加甫

单位：1. 石河子大学生命科学学院, 石河子 832003;2. 石河子大学动物科技学院, 石河子 832003

摘要：旨在构建稳定表达绵羊NYD-SP27基因的BHK-21细胞株，对NYD-SP27基因的表达特征进行分析，为进一步研究NYD-SP27基因功能奠定基础。本研究克隆绵羊NYD-SP27基因，并将其插入到真核表达载体pDsRed1-C1中，利用猪捷申病毒2A肽（P2A）将NYD-SP27蛋白和红色荧光蛋白连接以实现共表达，将重组质粒pDsRed-P2A-Flag-NYDSP转染至BHK-21细胞中，经G418筛选获得稳定转基因细胞株，利用RT-PCR、间接免疫荧光（Indirect immunofluorescence assay，IFA）和Western blot对NYD-SP27基因的表达进行鉴定。结果表明，NYD-SP27基因稳定整合至宿主细胞基因组；NYD-SP27蛋白能够在BHK-21细胞中正常表达，分子大小约为63 ku；在NYD-SP27蛋白和红色荧光蛋白翻译过程中，P2A成功自我剪切。本研究成功构建了绵羊NYD-SP27基因的真核表达载体，建立了稳定表达绵羊NYD-SP27基因的BHK-21细胞系。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金项目（31460683）