猪GM-CSF稳定表达细胞系的建立

来源：畜牧兽医学报杂志2017年第5期北京时间：

作者：李俊敏, 雍艳红, 巩栋梁, 冯园, 韦璇, 何玉林, 巨向红

单位：1. 桂林医学院, 桂林 541004;2. 广东海洋大学动物医学系, 湛江 524088;3. 广东海洋大学农学院动物科学系, 湛江 524088

摘要：旨在建立能稳定表达猪GM-CSF的细胞系。本研究利用NCBI已公布猪GM-CSF基因序列设计引物，采用RT-PCR法扩增出猪GM-CSF开放阅读框（ORF）。发现其长435 bp，编码144个核苷酸的蛋白。该蛋白分子质量为16.3 ku，等电点为7.15。与绵羊、马、猫、牛、狗和人的同源性分别为77.1%、73.6%、72.2%、71.5%、71.3%和70.8%。通过EcoR I和BamH I酶切后，将GM-CSF基因插入pIRES2-EGFP载体中，构建出pIRES2-EGFP-pGM-CSF重组质粒。该重组质粒转染猪肠上皮细胞（IPEC-J2）后，G418筛选阳性细胞。在转染后24 h，荧光定量PCR可见GM-CSF mRNA表达量较对照组及空载体组细胞显著升高（P<0.01），荧光显微镜下亦可见大量绿色荧光表达。该细胞系在含有G418的培养液中连续传代30次，仍可见GM-CSF基因和蛋白水平的高表达。本研究成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-pGM-CSF和能稳定表达猪GM-CSF的细胞系。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金（31101862；31472243）