猪DKK1基因启动子区的克隆及其活性分析

来源：畜牧兽医学报杂志2017年第6期北京时间：

作者：胡慧艳, 贾青, 侯胜奎, 刘津, 赵思思, 张伟峰, 张军, 张建亭, 边慧敏

单位：1. 河北农业大学 动物科技学院, 保定 071000;2. 国家北方山区农业工程技术研究中心, 保定 071000;3. 河北省山区农业工程技术研究中心, 保定071000;4. 河北工程大学 生命科学与食品工程学院, 邯郸 056000;5. 唐山市畜牧工作站, 唐山 063000;6. 安平县畜牧兽医站, 安平 053000;7. 邢台市畜牧站, 邢台 054000

摘要：旨在初步探索DKK1基因转录调控机制，本研究利用启动子在线预测软件分析了该基因启动子区序列特征，根据Ensembl数据库已公布的猪DKK1基因的5'侧翼区序列，设计特异性PCR引物进行扩增、测序，进而构建启动子区不同缺失片段的pGL3-DKK1双荧光素酶表达载体，分别转染293T细胞和Hela细胞，并进行双荧光素酶报告基因检测。结果显示，DKK1基因启动子中含有1个TATA-box、多种转录因子和1个CpG岛；DKK1基因启动子对239T细胞具有偏好性，其中p-1 679/+292 bp启动子片段活性最高，且显著高于其他缺失片段（P<0.01）。-953～-1 679 bp为核心启动子区域，-586～-953 bp区域可能存在负调控元件，在-953～-1 679 bp区域可能存在正调控元件。本试验通过对DKK1基因进行生物信息学分析并结合不同长度启动子片段双报告基因活性检测，证实了DKK1基因的5'侧翼区序列具有启动子转录活性，并初步确定了该基因的启动子区域，找到了启动子的核心区域和主要调控区域，为进一步研究DKK1基因转录调控机制奠定基础。

关键词：

基金资助：河北省现代农业产业技术体系专项（HBCT2013070202）