基于恒温隔绝式荧光PCR技术现场检测牛轮状病毒方法的建立及应用

来源：畜牧兽医学报杂志2017年第6期北京时间：

作者：李凡, 岳华, 邱莞思, 张斌, 黄建德, 汤承

单位：1. 西南民族大学生命科学与技术学院, 成都 610041;2. 国家民委青藏高原动物 疫病防控创新团队, 成都 610041;3. 金瑞鸿捷(厦门)生物科技有限公司, 厦门 361000

摘要：轮状病毒（rotavirus，RV）是犊牛腹泻的重要病因，笔者旨在建立基于恒温隔绝PCR（insulated isothermal PCR，iiPCR）技术现场检测牛轮状病毒（bovine rotavirus，BRV）的方法。根据BRV和牦牛RV VP6基因序列，设计合成引物和探针，通过优化反应体系，配合商品化PetNAD核酸萃取试剂盒，建立了检测BRV和牦牛RV的iiPCR方法。结果显示该方法只能检出BRV和牦牛RV，不能检出牛冠状病毒、牛星状病毒、牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、牛大肠杆菌、牛沙门菌、牛艾美尔球虫、牛瑞氏隐孢子虫等无关病原；检测下限为96.6 copies·μL-1，重复性好；对30 份牛腹泻样本和 30 份牦牛腹泻样本的检测结果表明，本方法对BRV的检出率是33.33%，对牦牛RV的检出率为73.33%，与文献报道的检测BRV和牦牛RV的方法的符合率分别为100%；对2016年四川阿坝藏羌自治州14个牧场的88份犊牦牛腹泻样本RV的检测结果显示RV核酸阳性检出率为98.86%。本研究建立的BRV iiPCR方法特异性好、灵敏度高、重复性好，既可用于BRV检测，又可用于牦牛RV的检测；从核酸提取到报告检测结果仅需1 h，操作方便，可现场使用，为BRV的现场快速诊断提供有力的工具。

关键词：

基金资助：十三五国家重点研发计划（2016YFD0500907）；国家民委科研项目（14XNZ025）