猪肺炎支原体和猪鼻支原体双重荧光定量PCR检测方法的建立

来源：畜牧兽医学报杂志2017年第8期北京时间：

作者：武昱孜, 熊祺琰, 刘蓓蓓, 张珍珍, 王佳, 华利忠, 韦艳娜, 邵国青

单位：1. 江苏省农业科学院兽医研究所, 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室, 国家兽用生物制品工程技术研究中心, 南京 210014;2. 省部共建国家重点实验室培育基地-江苏省食品质量安全重点实验室, 南京 210014

摘要：建立同时检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体的双重荧光定量PCR方法。根据猪肺炎支原体P97序列和猪鼻支原体P37序列的特异性引物，分别标记FAM和Texas Red荧光报告基团的2条TaqMan探针，建立和优化双重实时荧光定量PCR反应条件和体系，同时检测其敏感性、特异性和重复性。建立的双重荧光定量PCR对猪肺炎支原体和猪鼻支原体的最低检测值均为10 copies·μL-1；与猪源致病菌、病毒和其他常见细菌均无交叉反应；各浓度标准品的Ct值变异系数小于5%，重复性好。检测72份临床样本，其中猪肺炎支原体的肺阳性率为80%，鼻拭子阳性率22%，支气管肺泡灌洗液阳性率58.33%；猪鼻支原体的肺阳性率为40%，鼻拭子阳性率66%，支气管肺泡灌洗液阳性率41.67%。建立的双重荧光定量PCR方法比普通PCR更加敏感，实用性强，可用于临床样品的检测。该方法能同时快速和定量地检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体，在短时间内获得样品的多个信息，快速地解决了多次检测所需的时间以及经济消耗，为猪肺炎支原体和猪鼻支原体的监测和防控提供了新型、可靠的检测技术。

关键词：

基金资助：江苏省农业科技自主创新资金项目［CX（14）2040］；肉类生产与加工质量安全控制协同创新中心