同时监测8种牛常见病原体的GeXP高通量快速检测技术
来源：畜牧兽医学报杂志2017年第10期北京时间：
作者：范晴, 谢芝勋, 谢志勤, 谢丽基, 黄莉, 黄娇玲, 张艳芳, 曾婷婷, 王盛, 罗思思, 邓显文, 刘加波, 庞耀珊
单位：广西兽医研究所 广西兽医生物技术重点实验室, 南宁 530001
摘要：本研究旨在建立一种可同时检测8种常见牛传染病病原体（口蹄疫病毒、蓝舌病病毒、水疱性口炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、产肠毒大肠杆菌、牛传染性鼻气管炎病毒和小反刍兽疫病毒）的GeXP高通量快速检测方法。将多重PCR技术和毛细管电泳技术有效地结合，根据上述8种病原体的基因保守序列，设计并合成了8对特异性引物，在每对特异性引物的5'端加上一段通用引物，形成特异性嵌合引物。优化反应体系和反应条件，用单一病毒和混合病毒样品来验证所建立的GeXP方法的特异性，用克隆质粒稀释液来测试GeXP方法的灵敏度，检测305份临床样品，进一步验证该方法的可靠性。结果：优化后的GeXP检测体系，可扩增出各病原体对应的特异片段，能在100拷贝·μL-1水平同时并特异地检测出8种牛病病原体核酸。305份临床样品的检测结果与荧光PCR检测结果一致，阳性样品测序结果表明无非特异性扩增的假阳性。结果显示，所建立的GeXP方法具有高通量、特异性好、灵敏度高、方便快速等优点，可用于临床鉴别诊断和流行病学调查，具有较高的临床应用价值。
关键词：
基金资助：广西自然科学基金（2016GXNSFCA380003；2014GXNSFBA118105）；桂科（AB16380003）。
