柔嫩艾美耳球虫多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2的基因表达及转录动态分析

来源：畜牧兽医学报杂志2017年第11期北京时间：

作者：刘晓丽, 龚振兴, 马雪婷, 曲自刚, 韩政岚, 刘保红, 袁如意, 杨孝朴, 蔡建平

单位：1. 甘肃农业大学动物医学院, 兰州 730070;2. 中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学 国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室, 兰州 730046;3. 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009

摘要：蛋白质翻译后O-糖基化修饰普遍存在于真核生物、细菌和古细菌，多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶2（polypeptide：N-acetylgalactosaminyltransferase 2，ppGalNAc-T2）是O-糖基化反应的限速酶。基因组数据分析揭示艾美耳球虫具有O-糖基化反应途径。为研究柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）蛋白质翻译后糖基化修饰及其关键酶的药靶效用，对EtppGalNAc-T2基因进行了克隆，并检测其在E.tenella不同发育阶段的表达动态。根据EuPathDB中所预测EtppGalNAc-T2基因序列设计引物，以RT-PCR方法扩增获得EtppGalNAc-T2的ORF，插入酶切位点后连接到原核表达载体pGEX-6p-1进行诱导表达。提取E.tenella广东株未孢子化卵囊、孢子化7 h卵囊、孢子化卵囊、子孢子和第二代裂殖子5个发育阶段的总RNA，以qRT-PCR法检测EtppGalNAc-T2转录水平的动态变化。结果表明，EtppGalNAc-T2的全长ORF为1 983 bp，编码660个氨基酸，在E.coli Transetta （DE3）可溶性表达。qRT-PCR结果显示，EtppGalNAc-T2转录水平随发育阶段不同而有显著差异，子孢子阶段表达水平最高、而在孢子化卵囊则几近不能检出。结果为进一步研究EtppGalNAc-T2的功能提供了试验基础。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金（31272554）；中国农业科学院农业科技创新工程专项（2014-LVRI-09）