湖羊Sp1基因CDS区克隆及其对颗粒细胞增殖和凋亡的影响

来源：畜牧兽医学报杂志2017年第11期北京时间：

作者：姚一龙, 李隐侠, 安外尔热合曼, 张俊, 孟春花, 王慧利, 钱勇, 曹少先

单位：1. 江苏省农业科学院畜牧研究所, 南京 210014;2. 江苏省农业科学院动物品种改良和繁育重点实验室, 南京 210014;3. 南京农业大学动物科技学院, 南京 210095;4. 江苏省农业种质资源保护与利用平台, 南京 210014

摘要：旨在探讨湖羊Sp1基因序列特征及其对颗粒细胞增殖及凋亡的影响。采用克隆、测序获得湖羊Sp1基因CDS区并用生物信息学方法分析其序列特征；NJ方法构建基于Sp1氨基酸序列的系统进化树；RT-PCR方法检测Sp1基因湖羊组织表达谱；克隆方法构建湖羊Sp1过表达载体；试剂盒检测Caspase-3活性和CCK-8值；利用流式细胞术检测人卵巢颗粒细胞（KGN）凋亡率。结果表明，湖羊Sp1 CDS区长2 340 bp，编码779个氨基酸残基，与人的核苷酸序列和氨基酸序列的同源性分别为94.28%和95.75%；湖羊与牛的亲缘关系最近；Sp1基因在湖羊卵巢、卵泡等组织中广泛表达。本研究成功构建了湖羊Sp1过表达载体并转染人卵巢颗粒细胞（KGN）；试验组Caspase-3活性显著高于对照组（P<0.05），CCK-8值检测结果相反。表明过表达Sp1基因抑制KGN-细胞增殖（P<0.05）、促进KGN-细胞凋亡（P<0.05）。Sp1基因在哺乳动物中高度保守，湖羊Sp1基因可抑制人卵巢颗粒细胞（KGN）增殖、诱导其凋亡。

关键词：

基金资助：江苏省农业科技自主创新资金（CX （15）1007）；江苏省自然科学基金（BK20140705）