多头带绦虫dUTPase基因的原核表达、组织定位及酶学活性分析

来源：畜牧兽医学报杂志2017年第12期北京时间：

作者：黄兴, 徐璟, 王宇, 杨应东, 万洁, 郭承, 古小彬, 谢跃, 杨光友

单位：1. 四川农业大学动物医学院, 成都 611130;2. 成都农业科技职业学院, 成都 611130;3. 攀枝花农林科学研究院, 攀枝花 617061

摘要：探讨多头带绦虫脱氧尿苷三磷酸酶（Tm-dUTPase）的基因特征，并初步分析Tm-dUTPase的酶学活性。通过原核表达，得到重组Tm-dUTPase蛋白，并对其进行Western blot分析、免疫荧光定位及酶学活性分析。序列分析结果显示，Tm-dUTPase基因ORF框为447 bp，编码148个氨基酸，预测的蛋白质分子大小为16.39 ku，等电点为6.263；与猪囊尾蚴和豆状囊尾蚴dUTPase基因的氨基酸序列相似性分别为97%和91%。原核表达的Tm-dUTPase为可溶性蛋白，纯化后的蛋白质质量浓度为0.907 mg·mL-1，Western blot分析显示，该蛋白质能够被山羊脑多头蚴阳性血清所识别，具有较强的反应原性。免疫荧光定位显示Tm-dUTPase主要分布于多头带绦虫成虫的体内实质区，同时广泛分布于多头带绦虫幼虫（脑多头蚴）的头节和包囊囊壁外层。酶学活性试验测得重组Tm-dUTPase的比活力为986.29 U·mg-1，EDTA能够抑制Tm-dUTPase活性，而金属离子Mg2+、Zn2+、Cu2+能够增强Tm-dUTPase活性。上述结果为进一步研究Tm-dUTPase基因的生物学功能奠定了基础。

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基金资助：四川省科技支撑计划项目（2015NZ1504）