过表达Gata6诱导分离猪胚外内胚层干细胞样细胞

来源：畜牧兽医学报杂志2017年第12期北京时间：

作者：张伟, 张少鹏, 李恩宏, 曹安, 刘志宇, 韩建永, 曹素英

单位：1. 北京农学院动物科技学院, 北京 102206;2. 中国农业大学生物学院, 北京 100193

摘要：本研究对Gata6（G6）在猪诱导多能性干细胞（iPS细胞）以及胚外内胚层干细胞（XEN细胞）样细胞分离中的作用进行深入解析。从农大香猪的胎儿组织提取mRNAs，反转录为cDNAs，以此为模板克隆所需基因，构建逆转录病毒质粒pMXs-pOct4、pMXs-pSox2、pMXs-pKlf4、pMXs-pMyc、pMXs-pGata6、pMXs-pLin28、pMXs-pTbx3以及pMXs-pNanog，运用不同的基因组合感染猪胎儿成纤维细胞（PEF）。结果表明，Gata6与Oct4、Sox2、Klf4和mMyc（简称G6OSKM）共转染可以提高早期重编程效率，Gata6代替Oct4，与Sox2、Klf4和mMyc（简称G6SKM）可以诱导猪胎儿成纤维细胞为iPS（Induced pluripotent stem）细胞，但与OSKM（Oct4、Sox2、Klf4和mMyc）组相比，重编程效率下降。Gata6的过表达使获得的猪iPS细胞在重编程后期发生了分化，形态类似XEN细胞，这些细胞在小鼠胚外内胚层干细胞培养液培养可以维持XEN细胞的形态，表达胚外内胚层干细胞的标记基因，如Gata4、Gata6和Sox17。OSKM 4因子获得的猪iPS细胞过表达Gata6后，也可以产生胚外内胚层干细胞样细胞。综上表明，过表达Gata6可以进行猪胚外内胚层干细胞样细胞的分离，为从正常胚胎对猪XEN细胞的分离与建系，以及猪早期胚胎调控机制的解析提供理论依据。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金青年项目（31601941）；北京市自然科学基金（6152004）；北京市教委项目（PXM2016_014207_000008）；北京市大学生科研训练项目（5046516564/003）；2015科研水平提高经费-高级别科研项目培育（1086716274）；兽医学（中医药）北京市重点实验室科研培育项目