铁蛋白Ferritin原核表达和纯化及纳米颗粒胞外自组装

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第1期北京时间：

作者：李志鹏, 刘福航, 崔奎青, 石德顺, 刘庆友

单位：广西大学, 亚热带农业生物资源保护利用国家重点实验室, 南宁 530004

摘要：旨在使用原核表达系统表达幽门螺杆菌铁蛋白Ferritin，获得具有天然纳米结构的铁蛋白纳米颗粒，从而通过表面修饰等方法应用于疾病治疗和抗原呈递等研究。将铁蛋白氨基酸序列按照大肠杆菌常用密码子进行优化，合成重组铁蛋白基因并克隆至原核表达载体。使用镍柱进行亲和层析纯化重组蛋白，并在透析复性后利用透射电子显微镜对体外自组装纳米颗粒进行鉴定。结果显示，本研究成功构建了pET-32a-Ferritin原核表达载体，并使用IPTG进行诱导表达获得His-Ferritin重组铁蛋白，且主要以包涵体形式存在。通过镍柱进行亲和层析纯化获得纯度为96%的重组蛋白，使用脱盐柱将重组蛋白梯度透析至2 mol·L-1尿素缓冲液中进行复性后，使用电子显微镜观察胞外自组装重组蛋白为粒径在12~20 nm的均一的纳米结构，与天然铁蛋白纳米粒子类似。本研究成功建立了Ferritin蛋白原核表达体系，通过诱导表达、亲和层析纯化及复性获得了具有天然纳米结构的铁蛋白纳米颗粒，为其在生物医药领域的应用奠定基础。

关键词：

基金资助：国家863重点项目（2013AA102504）；广西科技开发项目（桂科攻1598013-2）；广西研究生教育创新计划项目（YCBZ2017004）