山羊DCT基因启动子活性区及其转录因子调控探究

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第1期北京时间：

作者：刘春杨, 张乐超, 王麒, 周荣艳, 李兰会, 李祥龙

单位：1. 河北农业大学动物科技学院, 保定 071000;2. 河北科技师范学院, 秦皇岛 066004

摘要：旨在探究山羊DCT基因启动子活性区及相关转录因子对该基因的调控作用，为山羊DCT基因的表达调控提供理论依据。通过对山羊DCT基因5'侧翼区序列及第一外显子区序列进行生物信息学分析，并与人和小鼠DCT基因启动子序列进行比对，同时结合在线启动子预测结果，采用快速克隆的方法构建5个5'系列缺失序列的启动子报告基因载体，以此为基础构建3'缺失序列的6个报告基因载体，并构建SOX10、MITF和OTX2转录因子结合位点点突变的6个报告基因载体，以瞬时转染的方法转染A375细胞，双荧光素酶检测试剂盒检测缺失片段和点突变片段的启动子活性。结果表明，成功构建了山羊DCT基因11个不同长度的启动子报告基因载体，-990~+232 bp的P3片段荧光素酶活性极显著高于其他片段（P<0.01），基于P3构建的3'系列缺失片段中-881~-154 bp的P8片段荧光素酶活性极显著高于其他片段（P<0.01）。转录因子SOX10结合位点突变的载体荧光素酶活性极显著降低（P<0.01），MITF和OTX2结合位点突变的载体荧光素酶活性极显著增强（P<0.01）。山羊DCT基因启动子核心调控区位于-881~-154 bp区域，转录因子SOX10对山羊DCT基因发挥正调控作用，而转录因子MITF和OTX2对山羊DCT基因的调控作用尚需深入研究。

关键词：

基金资助：河北省应用基础研究计划重点基础研究项目（15962901d）；河北省自然科学基金项目（C2015204176）