慢病毒介导siRNA抑制O型口蹄疫病毒ON株病毒复制

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第2期北京时间：

作者：齐兴财, 秦晓东, 甘晓丽, 张淑敏, 马友记, 李志勇

单位：1. 甘肃农业大学动物科学技术学院, 兰州 730070;2. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 兰州 730046

摘要：探究RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术对口蹄疫病毒复制的抑制作用，本研究选取O型口蹄疫病毒ON株，以ON株口蹄疫病毒3C、3D、VP1蛋白基因作为靶基因。对每一个靶基因设计并合成两对小片段发夹RNA （short hairpin RNA，shRNA）引物，分别命名为VP1-1、VP1-2、3C-1、3C-2、3D-1、3D-2，依据RNAi的原理构建6个shRNA的重组表达质粒，转染BHK21细胞后并接种ON口蹄疫病毒，通过对TCID50的测定和使用实时荧光定量PCR的检测筛选出能高效抑制ON口蹄疫病毒复制的重组质粒；将能够高效抑制ON口蹄疫病毒复制的重组质粒进行慢病毒的制备并筛选稳定的BHK21细胞系，通过对TCID50的测定和使用实时荧光定量PCR的检测慢病毒干扰载体对ON口蹄疫病毒复制的抑制作用。结果显示，构建的6个shRNA重组表达质粒抑制率均在71.5%~93.2%，其中PLKO.1-VP1-2和PLKO.1-3D-1的抑制效果最为明显，分别为93.2%和90.8%；慢病毒干扰载体PLKO.1-VP1-2和PLKO.1-3D-1的抑制效率在88.3%~95.49%。对研究结果表明，在细胞的水平上挑选出有效抑制ON口蹄疫病毒复制的基因干扰片段，并成功制备慢病毒干扰载体，为后续抗口蹄疫病毒的转基因羊生产培育奠定了实验基础。

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基金资助：甘肃省科技重大专项计划（143NKDA019）