牦牛Cyclin D1基因的克隆及IGF-I对其在睾丸支持细胞表达的影响

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第2期北京时间：

作者：王亚营, 潘阳阳, 叶小琳, 李谷月, 何翃闳, 王萌, 樊江峰, 崔燕, 余四九

单位：甘肃农业大学动物医学院, 兰州 730070

摘要：本研究旨在克隆牦牛（Bos grunniens）Cyclin D1基因的CDS序列，分析其生物学特性，研究胰岛素样生长因子-I （Insulin-like growth factor-I，IGF-I）对Cyclin D1 mRNA和蛋白在睾丸支持细胞（Sertoli cell，SC）中表达的影响。采集5～8月龄健康牦牛的睾丸样品进行SC的分离培养，用RT-PCR技术克隆牦牛Cyclin D1基因，用ORF Finder、MEGA7.0和DNAMAN对其进行生物信息学分析，并采用免疫荧光染色技术对Cyclin D1蛋白在SC中的表达进行定位分析。向体外培养的SC中加入不同浓度（0（对照组）、25、50、100、150 ng·mL-1）的IGF-I，采用实时定量PCR （qRT-PCR）和蛋白免疫印迹法检测Cyclin D1基因和蛋白的表达。结果表明：1）牦牛Cyclin D1基因（GenBank登录号：KY 420723）与其他物种的同源性均较高。2） Cyclin D1蛋白在SC胞核中高表达，为核蛋白。3）浓度为25和150 ng·mL-1IGF-I，Cyclin D1 mRNA表达量与对照组差异不显著（P>0.05），浓度为50和100 ng·mL-1IGF-I时，Cyclin D1 mRNA表达量显著高于其他各组（P<0.05）；IGF-I浓度为100 ng·mL-1，Cyclin D1蛋白表达量与对照组差异不显著（P>0.05），25、50和150 ng·mL-1 IGF-I组Cyclin D1蛋白表达量显著高于对照组（P<0.05）；IGF-I浓度为50 ng·mL-1时，Cyclin D1 mRNA和蛋白表达量均为最高，分别为对照组的1.65和1.20倍。综上表明，Cyclin D1基因在进化过程中高度保守；IGF-I可调控SC中Cyclin D1的表达，其最佳作用浓度为50 ng·mL-1。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金（31472244；31660732）