检测鸡TRIM25蛋白的免疫组化方法

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第4期北京时间：

作者：禇颖, 马文杰, 胡卫国, 陈茹, 邱建华, 郭慧君, 李宏梅

单位：山东农业大学动物科技学院, 山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室, 山东省畜禽疫病防制工程技术研究中心, 泰安 271018

摘要：为建立检测鸡TRIM25蛋白表达的免疫组化方法，根据发表的鸡TRIM25基因序列，设计引物，从海兰褐鸡脾中扩增TRIM25基因，构建重组原核表达质粒，通过诱导表达获得重组TRIM25蛋白，经纯化后免疫接种兔和小鼠，获得高效价血清抗体，用该抗体建立免疫组化方法，对鸡肺、脾、肝组织中TRIM25蛋白进行检测。结果显示，克隆的鸡TRIM25抗原基因大小为1 012 bp，构建的重组表达质粒能够在大肠杆菌中稳定表达，经纯化后的重组蛋白质能够诱导兔和小鼠产生效价为1∶106以上的血清抗体，该血清抗体免疫组化检测发现鸡肺、脾和肝组织中均有不同程度的TRIM25蛋白表达，在肺组织中主要存在肺泡周围的内皮细胞、淋巴细胞等的细胞质内；脾组织主要出现在脾淋巴细胞和血管内皮细胞等的细胞质中；肝组织中主要出现在肝小叶肝细胞、淋巴细胞以及血管内皮细胞细胞质中。该研究为深入研究鸡TRIM25蛋白的组织分布、动态表达和生物学活性提供物质基础和方法依据。

关键词：

基金资助：国家重点研发计划专项（2016YFD0500800）；山东省重点研发计划项目（2016CYJS05A02；2017CXGC0308）；山东省“双一流”奖补资金