Western blot鉴定背肩胛棕色脂肪黑皮质素4型受体的研究

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第4期北京时间：

作者：范奎奎, 李强, 杨文雅, 潘登, 李海军, 杜晨光

单位：1. 内蒙古农业大学兽医学院, 呼和浩特 010018;2. 内蒙古农业大学职业技术学院, 包头 014109

摘要：旨在探究Western blot检测低丰度蛋白表达及试验过程对检测结果的影响。本试验以6~8周龄C57/BL6小鼠背肩甲棕色脂肪组织（Brown adipose tissue，BAT）为试验材料，以低丰度表达的黑皮质素4型受体（Melanocortin-4-receptor，MC4R）为检测蛋白，不同蛋白处理方法及电转膜液的组分、pH为试验对照条件，探究蛋白提取方法、电转液的组分与pH对转膜效率的影响。结果显示，转膜初始电压及功率与转膜液中十二烷基磺酸钠（SDS）含量及pH极显著相关，恒流转膜时，转膜液中SDS含量与转膜电压及功率呈反比，pH为8.0时的转膜电压及功率极显著高于pH 7.6（P<0.01）和8.6的转膜电压及功率（P<0.001）；MC4R及相关蛋白在醇类物混合裂解液（20% Methanol+1% Triton+1% SDS+RIPA）的蛋白处理组的表达显著优于单独RIPA的蛋白处理组（P<0.05），极显著优于Trizol的蛋白处理组（P<0.01）。综上，于MC4R蛋白而言，在裂解液的基础上添加增强剂（Triton和SDS），可促进蛋白提取的效率，提高抗体检测的灵敏性。上述结果有助于相关操作人员对主要细节的认识，提高试验的灵敏及重复性。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金（31660701；31360283）