产气荚膜梭菌重组ε毒素突变体的免疫保护力评价

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第4期北京时间：

作者：杜吉革, 朱真, 薛麒, 李启红, 印春生, 彭小兵, 姚文生, 康凯, 陈小云

单位：中国兽医药品监察所, 北京 100081

摘要：旨在获得产气荚膜梭菌ε毒素的重组突变体，并评价其毒力及免疫原性。对已知的D型产气荚膜梭菌ε毒素编码基因进行了优化设计和人工合成，同时引入3个氨基酸点突变：第30和196位酪氨酸突变为丙氨酸，第106位组氨酸突变为脯氨酸。将该基因片段克隆至原核表达载体pET30a-（＋）中进行表达，并纯化。利用Western blot方法检测纯化蛋白质与D型产气荚膜梭菌ε毒素抗血清的反应性，并检测其对小鼠的毒力。随后，以纯化的重组蛋白质免疫兔，根据《中华人民共和国兽药典》（2015年版）规定的方法检测兔血清的中和抗体效价。结果表明，ε毒素的重组突变体为可溶性表达，通过灰度扫描，其表达量比例可达40%；该蛋白质能与D型产气荚膜梭菌ε毒素抗血清反应，小鼠安全试验显示，6.25×106 ng·kg-1的蛋白质仍无毒力；免疫兔血清对D型产气荚膜梭菌ε毒素的中和效价在一免后可达50～60最小致死量（MLD），二免后可达400～450 MLD；用1个MLD的D型产气荚膜梭菌毒素攻毒后，对照组4/4死亡，免疫组得到保护。由此表明，产气荚膜梭菌重组ε毒素突变体无毒力且保留了良好的免疫原性，为D型产气荚膜梭菌病新型疫苗的研制提供了重要的实验数据。

关键词：

基金资助：科技部十三五“牛羊重要疫病免疫防控新技术研究”重点专项课题（2017WFD0500903）；中国兽医药品监察所所级课题（201702）