山羊肌内前体脂肪细胞诱导分化过程中内参基因的表达稳定性分析

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第5期北京时间：

作者：许晴, 林森, 朱江江, 王永, 林亚秋

单位：1. 西南民族大学生命科学与技术学院, 成都 610041;2. 青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室, 成都 610041

摘要：旨在通过比较9个内参基因在山羊肌内前体脂肪细胞诱导分化不同时期的表达水平进而最终确定适合山羊肌内前体脂肪细胞分化调控研究最佳的内参基因。本研究利用胶原酶消化法获得山羊肌内前体脂肪细胞，并以分别诱导0、1、2、3、5和6 d的细胞为研究对象，利用荧光定量PCR （Real-time quantitative PCR，qPCR）技术和geNorm、NormFinder和BestKeeper程序来检测和分析9个候选内参基因（GAPDH、PPIA、18S rRNA、PPIB、UXT、RPLP0、ACTB、EIF3K和TBP）表达的稳定性，并以KLF3和KLF12的实际表达水平进行校正分析。geNorm和NormFinder程序分析表明，UXT稳定性相对最好；而BestKeeper程序分析发现，PPIB表达相对最平稳；3种软件分析结果均表明，同时使用UXT和PPIB可以准确校正在山羊肌内前体脂肪细胞诱导分化不同时期目标基因的表达；通过对KLF3和KLF12表达量的分析发现，选用筛选结果中最稳定（UXT和PPIB、UXT）和最不稳定（EIF3K和18S rRNA）的内参基因进行归一化分析结果有差异。在山羊肌内前体脂肪细胞诱导分化过程中，UXT基因是适合于山羊肌内前体脂肪细胞的成脂诱导分化研究最稳定有效的内参基因，同时使用UXT和PPIB作为内参基因能够获得更加精确的目标基因表达结果，这为后续山羊前体脂肪细胞分化调控相关基因的功能研究奠定了基础。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金项目（31672395）；四川省“十三五”畜禽育种攻关项目（2016NYZ0045）；中央高校基本科研业务费专项基金项目（2017NGJPY06）