猪圆环病毒3型TaqMan荧光定量PCR方法的建立和初步应用

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第6期北京时间：

作者：李畅, 库旭钢, 王俊伟, 李静, 朱玲, 何启盖

单位：1. 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室, 武汉 430070;2. 华中农业大学动物医学院, 武汉 430070

摘要：为了灵敏而便捷的检测猪圆环病毒3型（PCV3），根据PCV3 ORF2基因组保守序列设计合成4对引物，先使用荧光染料（SYBR）定量PCR法验证其能否有效扩增目的片段，并根据结果和引物对所扩增序列的交集进一步设计TaqMan探针，通过优化反应条件和反应体系建立快速检测PCV3的实时荧光定量PCR检测方法。结果显示，SYBR染料法和TaqMan探针法均能有效地扩增PCV3标准质粒以及其他阳性样品，并且对1.29×102~1.29×109拷贝·μL-1的PCV3标准质粒（Pmd18-t-Cap）呈现良好的线性关系，该方法的检测灵敏度为1.29×102拷贝·μL-1，比常规PCR的灵敏度高100倍，该方法与猪圆环病毒2型、猪轮状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等病毒基因以及猪链球菌、猪肺炎支原体等细菌基因均无交叉反应，具有良好的特异性；批次内重复和批次间重复试验结果显示变异系数（CV）均小于1.5%，呈良好的可重复性。用该方法对2016年至2017年间收集的124份来自湖北省等地的猪病料DNA样品进行检测，结果显示本地区PCV3阳性率为8.06%（10/124），PCV2和PCV3共感染率为8.06%（10/124）。上述结果表明，本研究建立TaqMan荧光定量PCR能够灵敏特异的检测圆环病毒3型，为圆环病毒3型的临床检测提供有效手段。

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基金资助：国家生猪产业技术体系资助项目（CARS-35）