猪圆环病毒3型LAMP检测方法的建立与应用

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第6期北京时间：

作者：姜辰龙, 严秀文, 张日腾, 李勇, 姜平, 白娟

单位：1. 南京农业大学生命科学学院, 南京 210095;2. 南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室, 南京 210095

摘要：为快速诊断和检测猪圆环病毒3型（PCV3），本研究根据其ORF2基因保守序列，设计特异性引物，并通过Bst DNA聚合酶、引物最佳浓度比例、Mg2+、dNTPs和甜菜碱浓度及反应条件优化，建立了环介导等温核酸扩增（LAMP）检测方法。结果显示，59℃恒温扩增36 min即可出现梯形条带，且产物亦可通过SYBR Green Ⅰ染色进行判断。该方法最低检测限为1.0×101copies·μL-1，与猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪瘟病毒（CSFV）及猪圆环病毒1型和2型（PCV1、PCV2）等均无交叉反应。检测68份呼吸道病猪淋巴结样品，PCV3阳性率占30.9%，与PCR检测结果符合率为95.6%（65/68）。相对传统PCR方法而言，该方法敏感特异，简便快速，可用于PCV3检测和临床诊断。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金（31672565；31502082）；中央高校基本科研业务费专项资金资助项目（KJQN201616）；国家生猪现代产业体系建设专项（CARS-36）