猪丁型冠状病毒S1基因的克隆、原核表达及多克隆抗体制备

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第6期北京时间：

作者：李成, 张雨迪, 黄小波, 刘浩宇, 刘志鹏, 赵玉佳, 曹三杰, 文心田, 文翼平, 赵勤, 伍锐

单位：四川农业大学动物医学院猪病研究中心, 成都 611130

摘要：本研究旨在克隆猪丁型冠状病毒（PDCoV）S1基因（1—1 566 bp），体外表达S1基因抗原表位预测区Sa（106—1 290 bp）蛋白并制备抗该蛋白质的多克隆抗体。运用生物信息学软件分析S1核苷酸和编码氨基酸序列特征，将S1基因抗原表位预测区Sa克隆至原核表达载体pET22b（+），构建重组表达载体pET22b-Sa，转化Rosetta（DE3）菌株，IPTG诱导表达、超滤柱浓缩纯化重组蛋白、Ni柱亲和层析，Western blot检测Sa蛋白的活性，将Sa蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结果表明，CHN-2015毒株S1基因开放型阅读框大小为1 566 bp（GenBank No.KY398009），编码522个氨基酸，是具有亲水性的非跨膜蛋白，存在15个潜在的B细胞抗原表位；原核表达Sa重组蛋白，该蛋白质在37℃下用终浓度为0.8 mmol·L-1IPTG诱导5 h后，蛋白质主要以可溶性形式存在，免疫印迹显示表达的Sa蛋白在上清与包涵体中都有良好的反应性；用纯化的Sa蛋白四次免疫家兔，获得的兔抗Sa蛋白抗体效价可达1∶10 240。本研究克隆了S1基因，原核表达了Sa蛋白和制备了高效价的兔抗Sa蛋白抗体，具有良好的免疫原性，为后续深入开展S蛋白的功能研究奠定了基础。

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基金资助：国家重点研发计划（2016YFD0500700）