变异猪流行性腹泻病毒M和N融合双基因的原核表达及表达产物免疫原性分析

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第6期北京时间：

作者：王隆柏, 王晨燕, 吴学敏, 陈秋勇, 车勇良, 陈如敬, 周伦江

单位：福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心, 福州 350013

摘要：旨在构建变异猪流行性腹泻病毒（PEDV）的M和N双基因融合质粒，并分析表达蛋白免疫原性。通过扩增变异PEDV FJFQ2014毒株（GenBank登陆号KJ646580）的M基因和N基因，将M基因克隆至pEASY-Blunt E2（pE2）表达载体，构建出pE2-M质粒。利用同源重组原理，采用无缝拼接试剂盒将N基因克隆至E2-M片段，转化到Trans 1-T1感受态细胞中，构建出pE2-M-N融合双基因质粒并转化Transetta（DE3），表达出相应的融合蛋白，采用SDS-PAGE和Western blot验证蛋白的表达情况。将纯化的M-N融合蛋白皮下接种BLAB/c小鼠，通过ELISA方法检测融合蛋白的免疫原性。结果表明：扩增出M和N基因，成功构建了pE2-M质粒，并将E2-M基因与N基因进行有效连接，构建出pE2-M-N融合双基因质粒，表达出了具有免疫原性的M-N融合蛋白，该蛋白能够诱导小鼠产生相应的特异性抗体。变异PEDV的pE2-M-N双基因融合质粒的构建，为进一步开展变异PEDV的诊断技术和免疫学等研究，奠定良好基础。

关键词：

基金资助：公益类科研院所专项（2018R1023-4）；福建省自然科学基金项目（2015J01112）；公益类科研院所专项（2017R1023-8）