VEGF对体外培养绒山羊次级毛囊外根鞘细胞的影响

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第6期北京时间：

作者：张婧婧, 王德光, 周小兵, 高晔, 何晓琳, 陈玉林, 张恩平

单位：西北农林科技大学动物科技学院, 杨凌 712100

摘要：本研究旨在探讨陕北白绒山羊毛囊外根鞘细胞的培养和VEGF对次级毛囊外根鞘细胞增殖、分化及细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、角蛋白10（K10）和成纤维细胞生长因子5（FGF 5） mRNA表达量的影响。采集绒山羊体侧部皮肤，并利用消化等方法分离次级毛囊外根鞘细胞，置于37℃、5% CO2、饱和湿度条件下培养；选用第5代次级毛囊外根鞘细胞，添加不同质量浓度血管内皮生长因子（VEGF），分别处理24、48 h，噻唑兰比色法（MTT）检测细胞活力，EdU核酸标记技术检测细胞增殖；实时荧光定量PCR技术检测PCNA、K 10、FGF 5 mRNA的表达情况。结果显示：1）成功培养出次级毛囊外根鞘细胞，CK17和CK15细胞免疫组化呈阳性。2） VEGF可以促进绒山羊次级毛囊外根鞘细胞的增殖。相同浓度VEGF处理48 h组的细胞活力极显著高于处理24 h组（P<0.01）；在48 h处理组中，100 ng·mL-1组的细胞活力极显著高于对照组、1 ng·mL-1组、10 ng·mL-1组（P<0.01），并显著高于50 ng·mL-1组（P<0.05），50 ng·mL-1组的细胞活力显著高于对照组（P<0.05）；100 ng·mL-1组和50 ng·mL-1组增殖细胞比例均极显著高于对照组、1 ng·mL-1组、10 ng·mL-1组（P<0.01），100 ng·mL-1组显著高于50 ng·mL-1组（P<0.05）。3）PCNA、K10、FGF 5 mRNA在次级毛囊外根鞘细胞中均有表达。在VEGF处理48 h时，PCNA mRNA的表达量100 ng·mL-1组最高，极显著高于对照组（P<0.01），显著高于10 ng·mL-1组（P<0.05）；K10 mRNA的表达量对照组最高，极显著高于10 ng·mL-1组与100 ng·mL-1组（P<0.01）；FGF 5 mRNA的表达量对照组最高，极显著高于100 ng·mL-1组（P<0.01）。综上表明，本研究成功分离培养了陕北白绒山羊次级毛囊外根鞘细胞；VEGF能够促进次级毛囊外根鞘细胞的增殖，抑制细胞的分化；VEGF可能通过抑制次级毛囊外根鞘细胞中FGF 5基因的表达而促进毛囊生长。

关键词：

基金资助：国家重点研发计划（2016YFD0500508）；陕西省重点研发计划（201TSCXL-NY-04-02）；陕西省农业科技创新转化项目（NYKJ-2016-04）