应用多重实时荧光PCR方法对8种动物毛纤维种类鉴别的研究

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第7期北京时间：

作者：刘艳艳, 范阳阳, 步迅, 胡悦, 东野升金, 谭晴晴, 张全芳

单位：山东省农业科学院生物技术研究中心/山东省农业科学院应用生命科学实验室, 济南 250100

摘要：本研究旨在利用多重实时荧光PCR方法对水貂、狐狸、骆驼、兔、山羊、绵羊、鸭和鹅8种动物毛纤维进行物种鉴定研究。利用碱裂解法加入二硫苏糖醇，并结合硅珠吸附核酸法来优化动物毛纤维DNA的提取；根据8种动物16S rDNA基因特异核苷酸序列设计通用PCR引物和特异性TaqMan荧光探针；通过优化引物和探针浓度及退火温度等PCR反应体系和条件，建立了多重实时荧光PCR检测体系；并对多重PCR体系的特异性、灵敏度、重复性和适用性进行评估。结果表明，使用SDS-二硫苏糖醇DTT-蛋白酶K结合Chelex-100法，并利用硅珠纯化提取动物毛纤维DNA效果最佳，满足实时荧光PCR检测要求。本方法DNA灵敏度为0.01 ng，混合样本方法检出限为1.0%。因此本方法能够从动物毛纤维提取高质量DNA，建立的多重实时荧光PCR检测体系具有特异性强、重复性好和灵敏度高等优势。本方法可用于水貂、狐狸、骆驼、兔、山羊、绵羊、鸭和鹅8种动物及其混合物毛纤维的鉴定，为拓展动物毛纤维在物种识别、分子进化研究、分子标记辅助育种和遗传资源评价等领域中的应用奠定基础。

关键词：

基金资助：国家自然基金青年科学基金（31702215）