利用酵母随机展示技术对猪肺炎支原体P97上B细胞表位的筛选和鉴定

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第7期北京时间：

作者：刘璐, 郭杰, 朱可蒙, 王宁, 辛九庆, 刘玉芬, 刘恒贵

单位：1. 哈尔滨师范大学生命科学与技术学院, 哈尔滨 150025;2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体团队, 哈尔滨 150069

摘要：构建猪肺炎支原体P97蛋白的酵母随机展示文库，并利用该文库筛选和鉴定P97蛋白上的特异性B细胞表位。设计特异性引物从Mhp基因组中扩增p97基因，通过PCR方法将基因内部的TGA密码子突变为TGG，用DNaseⅠ将p97突变基因随机消化成长度100~250 bp的片段，回收产物经3'端加A处理后与用XcmⅠ酶切的酵母表达载体pCT-XcmⅠ连接，将连接产物转化酿酒酵母EBY100获得P97蛋白酵母随机展示文库。利用流式细胞分选技术筛选出文库中能与Mhp天然感染的猪阳性血清结合的阳性酵母克隆，并进一步鉴定其最小抗原表位。结果：1）克隆计数显示构建的随机文库库容量为2.86×106克隆，所有插入的片段随机分布，覆盖了全长的p97突变基因，文库经诱导后可以利用流式细胞仪检测到与Mhp天然感染的猪阳性血清反应的阳性克隆；2）随后对文库进行流式细胞分选，经鉴定选出184号一个抗原多肽。从短肽C端氨基酸逐个缺失后发现长度为15个氨基酸的184D（DEKTSSQKDPSTLRA）多肽为一个B细胞表位，该表位能与多份Mhp阳性猪血清反应。P97蛋白酵母随机展示文库可以用于抗原表位的筛选鉴定，184D多肽是P97上一个在宿主体内能普遍诱导抗体免疫应答的B细胞表位，本研究对于研发Mhp的表位疫苗和建立特异性诊断方法具有重要意义。

关键词：

基金资助：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（1610302016005；1610302017014）