表达禽网状内皮组织增生病病毒env基因的重组马立克病毒的生物学特性

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第7期北京时间：

作者：周忠文, 林桂芳, 王好好, 苏帅, 崔治中, 孙淑红

单位：1. 山东农业大学动物医学院, 泰安 271018;2. 山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室, 泰安 271018;3. 山东省畜禽疫病防制工程技术研究中心, 泰安 271018

摘要：旨在构建能够表达禽网状内皮组织增生病病毒（reticuloendotheliosis virus，REV）env基因的重组马立克病毒（Marek's disease virus，MDV），并对其生物学特性进行初步研究。以REV SNV株DNA为模板，PCR扩增其env基因，克隆进真核表达载体pcDNA3.1（+）；以其为模板，PCR扩增整个REV env基因真核表达盒并与卡那霉素抗性基因分别克隆进pUC18载体；以其为模板，利用含有MDV SC9-1株meq基因位点两侧同源臂的引物经PCR扩增REV env真核表达盒以及卡那霉素抗性基因，利用Red E/T同源重组技术插入SC9-1的meq位点，最终利用阿拉伯糖诱导表达flp重组酶，敲除卡那霉素抗性基因，阳性重组质粒命名为SC9-env BAC。提取SC9-env BAC质粒转染CEF细胞，拯救重组MDV，利用MDV单抗H19以及REV单抗11B118经间接免疫荧光试验鉴定阳性病毒，命名为SC9-env。分析比较SC9-env在CEF细胞上的复制水平，利用动物试验初步评价SC9-env对SPF鸡的致病性以及SC9-env对SPF鸡感染MDV、REV的免疫保护效果。结果表明，利用同源重组技术构建的重组MDV SC9-env能够稳定表达REV env蛋白，且复制水平与亲本病毒SC9-1相似；该重组毒接种SPF鸡没有明显的致病性，且对rMd5的强毒攻击提供92%的免疫保护，与SC9-1差异不显著；SC9-env显著降低REV感染SPF鸡所引起的体重减轻以及灭活苗抗体下降。构建的表达REV env的重组MDV对感染MDV、REV的SPF鸡具有良好的免疫保护效果。

关键词：

基金资助：山东省科技发展计划项目（2014GNC110006）；国家自然科学基金青年基金项目（31402235）；山东省“双一流”奖补资金