流行性出血病多克隆抗体C-ELISA检测方法的建立

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第7期北京时间：

作者：朱建波, 杨振兴, 肖雷, 高林, 苗海生, 何于雯, 孟锦昕, 杨恒, 李华春

单位：云南省畜牧兽医科学院, 云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室, 昆明 650224

摘要：为能简便、快速地进行流行性出血病病毒（epizootic haemorrhagic disease virus，EHDV）抗体监测，采用纯化的6型EHDV抗原包被ELISA板，以豚鼠抗EHDV-2型多克隆抗体作为竞争抗体，建立了检测EHDV群特异性抗体的竞争ELISA（C-ELISA）方法。结果显示：抗原最佳包被浓度为5.12 μg·mL-1（1：10 000），竞争抗体最佳稀释倍数为1：10 000；通过对各270份阴性和阳性的牛、羊血清检测，确定该检测方法临界值为50%；特异性试验表明该ELISA方法仅能检测出不同血清型EHDV抗体，具有较好的群特异性；对已知抗体效价的阳性血清检测表明，建立的C-ELISA方法敏感性好于血清中和试验（SNT）和琼脂扩散试验（AGID）；分别用C-ELISA、SNT、RT-PCR和病毒分离试验对监控动物采集的血清和抗凝血样品进行检测，ELISA结果与其他3种方法检测结果对应一致。结果表明本研究建立的C-ELISA为EHDV抗体的检测提供了一种快速、敏感、稳定的方法。

关键词：

基金资助：国家重点研发计划（2016YFD0500908）；国家公益性行业（农业）科研专项（201303035）