牦牛Smad 4基因3'UTR区双荧光素酶载体构建及与bta-miR-146a的靶向验证

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第7期北京时间：

作者：牛家强, 王玉恒, 索朗斯珠, 强巴央宗, 徐业芬, 郭敏, 程玲华, 杨士承

单位：1. 西藏农牧学院动物科学学院, 林芝 860000;2. 西藏农牧学院西藏高原动物疫病研究 自治区高校重点实验室, 林芝 860000;3. 中国农业大学动物科技学院, 北京 100193

摘要：旨在鉴定牦牛Smad 4基因与bta-miR-146a的靶向关系，为探究它们在牦牛卵巢卵泡发育过程中的可能分子调控机制提供理论基础。利用miRBase数据库和MEGA 6.0软件分析miR-146a在不同物种中的保守性，同时利用TargetScan软件预测其潜在靶基因，通过构建psiCHECK2双荧光素酶报告基因载体进行靶向验证。生物信息学分析结果显示，miR-146a成熟序列在脊椎动物中具有高度的保守性，并预测到178个与卵巢卵泡发育相关的潜在靶基因，从中选取Smad 4基因分析发现其3'非编码区域（3'UTR）与bta-miR-146a存在结合位点；进一步成功构建牦牛Smad 4基因3'UTR野生型及突变型psiCHECK2双荧光素酶报告质粒，荧光素酶活性检测结果显示，bta-miR-146a mimic对牦牛Smad 4基因3'UTR野生型报告质粒荧光活性有明显的下调作用，分别与突变型及NC对照组差异显著（P<0.05）。本研究初步证实，牦牛Smad 4基因是bta-miR-146a的靶基因，从而提示bta-miR-146a可能通过调控Smad 4基因在牦牛卵巢卵泡发育过程中的表达发挥作用。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金项目（31460604）；西藏自治区科技厅厅校联合基金项目（XZ2017ZRG-25）；中西部高校综合实力提升计划：西藏农牧学院动物遗传育种与繁育学科建设（502000105）；国家肉牛牦牛产业技术体系项目（CARS-37）