自噬在骨保护素对破骨细胞及其前体凋亡过程的调控机制

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第8期北京时间：

作者：刘庆羊, 孙自强, 赵鸿雁, 宋瑞龙, 顾建红, 刘宗平

单位：1. 扬州大学兽医学院, 扬州 225009;2. 扬州大学比较医学研究院, 扬州 225009;3. 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009;4. 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室, 扬州 225009

摘要：为了探讨骨保护素（osteoprotegerin，OPG）对破骨细胞及其前体自噬与凋亡的影响，本研究以RAW264.7细胞诱导分化形成的破骨细胞（osteoclasts，OCs）及其前体（osteoclast precursors，OCPs）为研究对象，通过自噬促进剂雷帕霉素（rapamycin，RAP）或自噬抑制剂氯喹（chloroquine，CQ）分别预处理1 h和30 min后，再添加80 ng·mL-1OPG作用细胞6 h，试验分为对照组（Con）、OPG、CQ、CQ+OPG、RAP和RAP+OPG组，利用免疫印迹法（Western blot）检测细胞自噬相关蛋白；流式细胞术Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率。结果显示，与对照组相比，OPG组OCPs的Atg5和Beclin-1水平极显著或显著上调（P<0.01或P<0.05），但LC3-Ⅱ无显著差异（P>0.05）；与OPG组相比，RAP+OPG组OCPs中的LC3-Ⅱ水平极显著上调（P<0.01）；与对照组相比，OPG组OCs中LC3-Ⅱ、Atg5和Beclin-1水平极显著下调（P<0.01）；与OPG组相比，RAP+OPG组OCs的Atg5和Beclin-1水平极显著下调（P<0.01）。与对照组相比，OPG处理组和RAP+OPG组OCPs凋亡率极显著上升（P<0.01），CQ+OPG组凋亡率无显著差异（P>0.05）；RAP+OPG比OPG组OCPs凋亡率极显著增加（P<0.01）；与对照组相比，OPG组OCs凋亡率极显著降低（P<0.01），CQ+OPG组凋亡率极显著下降（P<0.01），RAP+OPG组凋亡率极显著下降（P<0.01）。表明OPG能够促进OCPs发生自噬，而自噬的激活促进了OCPs的凋亡；OPG抑制OCs自噬的发生，并且抑制和激活自噬都能抑制OCs的凋亡。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金（31672620；31502128；31702304）；江苏省高校优势学科建设工程资助项目（PAPD）