羊口疮病毒F1L、B2L基因重组腺病毒构建及对小鼠的免疫效果分析

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第8期北京时间：

作者：陈晓, 葛雷, 戴建军, 李丽, 张德福, 吴彩凤, 张树山

单位：1. 上海市农业科学院畜牧兽医研究所, 上海 201106;2. 锦州医科大学畜牧兽医学院, 锦州 121001;3. 上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室, 上海 201106

摘要：选取自剪切T2A和P2A肽，连接F1L和B2L基因，构建羊口疮病毒（orf virus，ORFV）重组腺病毒，并对其免疫效果进行评价，为羊口疮的疫苗研制提供依据。应用PCR扩增ORFV-F416毒株的F1L、B2L目的基因，构建重组腺病毒穿梭质粒，穿梭质粒与骨架质粒共转染HEK-293细胞，包装出ORFV重组腺病毒。将重组腺病毒感染MDBK细胞，收集上清液免疫ICR小鼠，并进行间接ELISA、淋巴细胞增殖、ORFV攻毒试验等初步评价小鼠免疫效果。结果显示：成功获得pAV-CMV-F1L-T2A-B2L-P2A-EGFP重组腺病毒，其TCID50为10-5.375·mL-1，PCR和IFA检测证实目的基因在基因及蛋白水平上均有表达。ORFV重组腺病毒免疫小鼠后，其抗体水平迅速升高。ORFV重组腺病毒组对特异性抗原ORFV表现出明显的T淋巴细胞增殖能力，极显著高于PBS组（P<0.01）。本文的研究结果表明：F1L和B2L基因重组腺病毒能够刺激小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答，且未影响小鼠正常采食，保护效力较好。

关键词：

基金资助：上海市科委实验动物专项（15140900300；17140900100）；上海市农委青年人才计划（沪农青字（2015）第1-36号）；上海市农业科学院攀高计划（PG171）；上海市种业发展项目（沪农科种字（2017）第3-3号）