日本乙型脑炎病毒强、弱毒株非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-NS2A诱导小鼠CD4⁺T细胞应答的研究

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第8期北京时间：

作者：杨伟, 韦冠东, 汤德元, 曾智勇, 黄涛, 王彬, 胡玲玲, 龙冬梅, 黄秋涵, 廖晓糠, 田红宇

单位：1. 贵州大学动物科学学院, 贵阳 550025;2. 贵州大学明德学院, 贵阳 550025

摘要：为了解日本乙型脑炎病毒（JEV）强、弱毒株非结构蛋白的免疫效果，笔者分析了JEV强、弱毒株非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-2A真核表达的差异。通过观察JE减毒活疫苗（SA14-14-2株）和JEV贵州分离株（GZ株）分别在BHK-21细胞上出现的CPE，并收集强、弱毒株的细胞悬液，提取总RNA，分别设计6对特异性引物，应用RT-PCR技术扩增非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-2A的编码基因，构建真核表达质粒pcDNA3.1（+）-NS1r、pcDNA3.1（+）-NS2Ar、pcDNA3.1（+）-NS1-2Ar、pcDNA3.1（+）-NS1q、pcDNA3.1（+）-NS2Aq和pcDNA3.1（+）-NS1-2Aq，将构建成功的6种真核表达质粒免疫健康小鼠，最后采集小鼠的血液和组织分别进行JEV抗体检测和细胞免疫水平检测。研究结果显示：JEV GZ强毒株与JEV SA14-14-2弱毒株能在BHK21细胞上增殖并产生CPE现象；构建的6种真核表达质粒免疫小鼠后经血常规和T淋巴亚群检测可以极显著或显著增加CD4+和CD8+细胞的含量。表明JEV强毒株非结构蛋白所诱导的细胞免疫略优于弱毒株非结构蛋白诱导的细胞免疫，但差异不明显。本研究结果可为日本乙型脑炎病毒的病原基础研究提供参考。

关键词：

基金资助：贵州省2017年农业攻关项目资助（黔科合支撑[2017]2579号）；贵州大学引进人才博士基金项目（贵大人基合字（2015）33号）；贵州大学大学生创新创业训练计划项目（贵大（国）创字2016（021）号）