绵羊卵母细胞3种体外培养方式下外源添加血管内皮生长因子对FLT-1表达的影响

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第9期北京时间：

作者：曹忻, 邹云龙, 陆会宁, 高丹丹, 周平, 石国庆, 杨具田

单位：1. 西北民族大学实验教学部, 兰州 730030;2. 西北民族大学生命科学与工程学院, 兰州 730030;3. 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所, 石河子 832000

摘要：本研究旨在探究外源添加血管内皮生长因子（VEGF）对绵羊卵母细胞体外成熟过程中FLT-1表达的影响。采用3种不同的体外成熟培养方式：裸卵单独培养、颗粒细胞与裸卵共培养以及卵丘-卵母细胞复合体（cumulus-oocytes complexes，COCs）培养，外源添加5 ng·mL-1血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）为试验组，不添加为对照组，采用qPCR、Western blot分别检测绵羊卵母细胞及颗粒细胞中FLT-1 mRNA和蛋白表达水平。结果表明：1）3种不同培养方式下，无论是否添加VEGF，颗粒细胞与卵母细胞中均能检测到FLT-1 mRNA和蛋白表达。添加VEGF能极显著降低共培养试验组12、16和20 h以及COCs试验组4、8、12、16和24 h颗粒细胞FLT-1 mRNA表达（P<0.01），能极显著降低共培养试验组12、20和24 h以及COCs试验组4、8和12 h卵母细胞FLT-1 mRNA表达（P<0.01），但会极显著增加裸卵试验组4～24 h卵母细胞FLT-1 mRNA表达（P<0.01）。2）添加VEGF能够极显著降低共培养试验组和COCs试验组中颗粒细胞FLT-1蛋白4～12 h的表达量（P<0.01），共培养试验组和COCs试验组中颗粒细胞FLT-1蛋白表达呈波动性下降趋势。COCs对照组和试验组颗粒细胞中FLT-1蛋白表达量在各时间点均高于同期共培养试验组。3）3种不同培养方式中，除裸卵试验组在20～24 h有一个急剧升高外，其余组中卵母细胞FLT-1蛋白表达量总体均呈波动性下降趋势。综上表明，卵母细胞和颗粒细胞中存在FLT-1的自分泌和旁分泌，卵母细胞中FLT-1 mRNA的表达与外围颗粒细胞的存在与否、数量多少以及包裹方式息息相关；在体外培养环境下，添加VEGF有效地激活了FLT-1 mRNA表达，但同时结合FLT-1蛋白以促进卵母细胞成熟的生物学效应，从而减少了FLT-1蛋白的表达。

关键词：

基金资助：甘肃省自然科学基金项目（1610RJZA104）；中央高校专项基金项目（31920160004；31920170172）