腺病毒载体介导Smad3基因在秦川牛前体脂肪细胞中的过表达和沉默

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第9期北京时间：

作者：张乐, 宁越, 李佩韦, 王洪宝, 昝林森

单位：1. 西北农林科技大学动物科技学院, 杨凌 712100;2. 国家肉牛改良中心, 杨凌 712100

摘要：旨在通过在秦川牛前体脂肪细胞中过表达和沉默Smad3基因，探讨其在秦川牛前体脂肪细胞分化过程中的生物学功能，从而为阐明TGF-β信号通路在牛脂肪组织生长发育过程中发挥的作用提供理论依据。本试验采用Ad5腺病毒改建的AdMaxTM重组腺病毒包装系统成功重组获得了过表达腺病毒pDC316-EGFP-bSMAD3和干扰腺病毒pDC316-EGFP-ShRNA-bSMAD3-1405。感染牛前体脂肪细胞后，利用实时荧光定量检测Smad3基因及脂肪形成相关基因mRNA的表达。结果表明，将获得的具有较高滴度的过表达腺病毒pDC316-EGFP-bSMAD3感染秦川牛前体脂肪细胞3、6、9 d后，分别较对照组Smad3基因表达量显著上调了1 031、1 286、633倍（P<0.001）。与对照组相比，高滴度干扰腺病毒pDC316-EGFP-ShRNA-bSMAD3-1405感染牛前体脂肪细胞3、6、9 d后，Smad3基因的表达量分别下调了70%、55%、57%（P<0.01）。油红O染色和实时荧光定量结果均证明，Smad3基因抑制了前体脂肪细胞脂质积累并促使标志基因PPARγ、FABP4、C/EBPα和C/EBPβ的表达显著下调。综上所述，腺病毒载体介导体外表达载体可以成功的实现Smad3基因在秦川牛前体脂肪细胞中的过表达和沉默，并对秦川牛前体脂肪细胞的成脂分化具有一定的调控作用。

关键词：

基金资助：国家科技支撑计划（2015BAD03B04）；国家肉牛牦牛产业技术体系（CARS-37）