牛冠状病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第10期北京时间：

作者：何琪富, 郭紫晶, 李然, 周军, 岳华, 张斌, 汤承

单位：1. 西南民族大学生命科学与技术学院, 成都 610041;2. 国家民委青藏高原动物疫病防控创新团队, 成都 610041

摘要：本试验的目的是建立更加灵敏的检测牛冠状病毒（BCoV）的RT-PCR方法，并对川西北草原牦牛病料进行BCoV病原检测。选择BCoV聚合酶基因Nsp7-Nsp9片段设计引物，通过反应条件和体系优化，建立检测BCoV的RT-PCR方法并应用于临床样本检测。结果显示：所建方法特异性和重复性好，灵敏性达到1×10-2 pg·μL-1；该方法对肉牛和牦牛BCoV都有良好的检测效果，优于比较的两种以BCoV N基因为靶点的RT-PCR方法；对2016年采集的川西北草原牦牛病料进行了BCoV的检测，结果显示：125份腹泻牦牛粪便样本中BCoV的检出率为71.20%，98份患呼吸道疾病的牦牛鼻腔棉拭子中BCoV的检出率为72.45%。此次建立的BCoV RT-PCR检测方法特异性和重复性好、灵敏度高；BCoV是当前川西北草原牦牛腹泻和呼吸道疾病综合征的重要病原。

关键词：

基金资助：十三五国家重点研发计划课题（2016YFD0500907）；国家民委"青藏高原动物疫病防控创新团队"（13TD0057）；西南民族大学研究生"创新型科研项目"（CX2017SZ061）