10种猪常见病毒基因芯片检测方法的建立及初步应用

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第10期北京时间：

作者：罗宁, 王群, 张小龙, 房保海, 姜帆, 石玲玲, 王冬冬, 杨宗统, 王守春, 徐彪, 尹燕博

单位：1. 青岛农业大学动物医学院, 青岛 266109;2. 山东出入境检疫检验局/食品农产品检测中心, 青岛 266001;3. 青岛博隆实验动物有限公司, 青岛 266225;4. 澳兰百特生物工程有限公司, 青岛 266101

摘要：旨在建立一种可同步检测猪10种常见疫病病毒，猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）、猪瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）、猪伪狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）、猪圆环病毒2型（porcine circovirus 2，PCV2）、猪细小病毒（porcine parvovirus，PPV）、猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus of swine，TGEV）、猪流感病毒（swine influenza virus，SIV）、猪巨细胞病毒（porcine cytomegalovirus，PCMV）和口蹄疫病毒（food-and-mouth disease virus，FMDV）的基因芯片检测技术，为临床病料的初步诊断及流行病学调查提供一个新的可靠方法。对10种病毒基因的序列进行分析，设计引物对靶基因进行PCR扩增，将纯化后的靶基因点制成芯片，通过Cy3标记特异性引物扩增病毒得到具有荧光标记的探针，然后与芯片进行杂交，扫描分析结果，建立其基因芯片检测方法，并对该方法的特异性、敏感性和稳定性进行检测。应用建立的基因芯片检测方法和普通PCR/RT-PCR方法对1 006份样品进行符合检测。试验结果表明，基因芯片检测10种病毒特异性好、灵敏度高，最低检测限度可达105 copies·μL-1，检测中，基因芯片与普通PCR/RT-PCR对1 006份临床样品的检测符合率为96.79%以上。初步研究表明，该基因芯片技术可同时同步检测10种猪疫病病毒，可应用于临床病料的初步诊断。

关键词：

基金资助：国家科技支撑计划（2015BAI07B01）