噬菌体Bp7蛋白gp38的克隆、表达及其受体识别活性分析

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第11期北京时间：

作者：麻海澜, 孙虎芝, 任慧英, 张灿

单位：青岛农业大学动物医学院, 青岛 266109

摘要：为了研究噬菌体Bp7蛋白gp38在噬菌体吸附宿主菌过程中的作用，PCR扩增gp38基因，对gp38蛋白氨基酸序列特征进行分析和同源性比对，构建重组表达质粒pColdTF-gp38，在E.coli BL21中诱导表达，SDS-PAGE电泳和Western blot检测重组蛋白gp38的表达；亲和层析法纯化蛋白，制备gp38多克隆抗体。免疫电镜检测gp38在噬菌体Bp7表面的定位，蛋白竞争试验和抗体阻断试验测定gp38及其抗体对噬菌体Bp7吸附效率的影响。序列分析结果表明，gp38蛋白氨基酸序列与T4噬菌体无同源性，与噬菌体T2、T6有同源性，C端序列保守区与高变区间隔排列，呈现马赛克特征；构建的重组质粒pColdTF-gp38在E.coli BL21实现可溶性表达，制备的gp38多克隆抗体效价达1∶16；免疫电镜检测结果表明，gp38蛋白抗体能够与长尾丝结合，引起噬菌体Bp7的聚集；蛋白竞争试验和抗体阻断试验结果表明gp38蛋白及其抗体均能完全抑制噬菌体Bp7对宿主菌E.coli K12的吸附。以上研究结果表明，gp38是噬菌体Bp7的尾丝蛋白，位于长尾丝末端，作为受体识别蛋白在噬菌体Bp7吸附宿主菌过程中具有关键作用，这为进一步阐明宽宿主谱噬菌体Bp7识别受体的机制提供了理论基础。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金（31600149）；国家级大学生科技创新项目（201710435008）；青岛农业大学大学生科技创新项目