小鼠miR-487b-3p对C2C12增殖和分化调控作用的研究

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第11期北京时间：

作者：凌笑笑, 唐朋, 贾聪俊, 梁春年, 吴晓云, 褚敏, 阎萍

单位：1. 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所, 甘肃省牦牛繁育重点实验室, 兰州 730050;2. 甘肃农业大学动物科技学院, 兰州 730050

摘要：旨在研究miR-487b-3p对小鼠C2C12细胞增殖与分化的具体调控机制。本研究以小鼠成肌细胞系（C2C12）为研究对象，利用qRT-PCR检测miR-487b-3p在小鼠各组织和C2C12细胞增殖与分化过程中的表达情况；通过转染miR-487b-3p mimics和miR-487b-3p inhibitor后，利用qRT-PCR检测转染效率，并采用qRT-PCR和Western blotting检测增殖标记基因PCNA和分化标记基因MYOD、MYOG和MYHC的表达差异；利用生物信息学软件对miR-487b-3p靶基因进行预测，利用qRT-PCR检测小鼠C2C12细胞增殖与分化过程中PITX2的表达情况，并检测过表达（抑制） miR-487b-3p后PITX2的表达差异，通过双荧光素酶报告系统验证miR-487b-3p和PITX2的靶标关系。结果表明，miR-487b-3p在小鼠骨骼肌中相对表达最高，在C2C12细胞增殖与分化的过程中miR-487b-3p的表达量整体上呈现上升趋势，推测miR-487b-3p参与调控骨骼肌发育。过表达miR-487b-3p后，极显著上调miR-487b-3p的表达（P<0.01），在转录和蛋白水平均极显著上调PCNA的表达（P<0.01），显著下调MYHC、MYOD和MYOG基因的表达（P<0.05），同时显著下调MYHC （P<0.05）、MYOD （P<0.01）和MYOG蛋白（P<0.05）的表达；而抑制miR-487b-3p后，极显著下调miR-487b-3p的表达（P<0.01），显著下调PCNA基因的表达（P<0.05），极显著下调PCNA蛋白的表达（P<0.01），显著上调MYHC、MYOD和MYOG蛋白的表达（P<0.05），上调MYHC、MYOD和MYOG基因的表达，但未达显著水平（P>0.05）。在C2C12细胞增殖和分化过程中，PITX2与miR-487b-3p表达趋势相反；过表达miR-487b-3p能极显著下调PITX2 mRNA的表达（P<0.01），相反，抑制miR-487b-3p的表达则极显著上调PITX2 mRNA的表达（P<0.01）；双荧光素酶报告系统验证PITX2是miR-487b-3p的直接靶基因。综上表明，miR-487b-3p通过靶向PITX2促进C2C12细胞增殖而抑制其分化。

关键词：

基金资助：现代肉牛牦牛产业技术体系（CARS-37）；中国农业科学院创新工程项目（CAAS-ASTIP-2014-LIHPS-01）