猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白的ITIM基序对IFN-β产生的正调节作用

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第12期北京时间：

作者：魏凤灵, 张莹莹, 许瑞勤, 李闻, 李想通, 孙杨杨, 张留君, 杨国宇, 夏平安, 张改平

单位：河南农业大学 牧医工程学院, 郑州 450002

摘要：为了研究PRRSV M蛋白的ITIM基序对IFN-β产生的激活机制，以PRRSV Hn-1/06毒株cDNA为模板扩增ORF6基因片段，分别构建了重组质粒pcDNA3.0-GP6、pcDNA3.0-GP6△ITIM（缺失ITIM基序）。将重组质粒分别转染Marc-145细胞，用荧光定量PCR方法检测TRIF、MyD88、TRAF6、IRF3、IRF7、NF-κB和IFN-β的mRNA转录水平；结果表明，pcDNA3.0-GP6组与pcDNA3.0-GP6△ITIM组相比：TRIF、IRF3、IRF7 mRNA转录水平上调（此处为总体趋势，个别时间点可能不完全相符，下同），MyD88、TRAF6 mRNA转录水平下调。分别将重组质粒和Poly（I：C）共转染Marc-145细胞，检测TRIF、IRF3、IRF7、NF-κB和IFN-β mRNA转录水平；结果表明，pcDNA3.0-GP6组与pcDNA3.0-GP6△ITIM组相比，TRIF、IRF3、IRF7 mRNA转录水平上调，NF-κB、IFN-β mRNA转录水平在36 h上调。将SHP-1-siRNA-781、SHP-2-siRNA-1335分别与pcDNA3.0-GP6、pcDNA3.0-GP6△ITIM重组质粒共转染Marc-145细胞，通过荧光定量PCR方法检测TRIF、IRF3、IRF7、NF-κB和IFN-β mRNA转录水平；结果表明，沉默SHP-1后，pcDNA3.0-GP6组与pcDNA3.0-GP6△ITIM组相比，TRIF、IRF3、IRF7和IFN-β mRNA转录水平12 h后显著下调；而沉默SHP-2后，TRIF、IRF3、NF-κB、IFN-β mRNA转录水平均为先升高再降低，后趋于稳定，而IRF7 mRNA转录水平被持续上调到48 h。M蛋白的ITIM基序可能通过调节TLR3-TRIF依赖型信号通路激活IFN-β的产生；SHP-1在M蛋白的ITIM基序激活Ⅰ型干扰素的信号传导途径中可能起关键调节作用，而ITIM基序与SHP-2的关系还需要进一步探索。本试验结果为进一步明确ITIM基序的作用机制提供参考。

关键词：

基金资助：国家自然科学基金重大项目（31490600）；国家自然科学基金面上项目（31572520）