基于液质联用技术定量分析牛体外受精胚胎中谷胱甘肽含量

来源：畜牧兽医学报杂志2018年第12期北京时间：

作者：李凤, 崔立欣, 郝海生, 刘岩, 赵学明, 庞云渭, 朱化彬, 杜卫华

单位：中国农业科学院 北京畜牧兽医研究所, 北京 100193

摘要：旨在为探索外源谷胱甘肽（glutathione，GSH）影响胚胎发育的机制提供研究方法。将牛体外受精胚胎分别置于含GSH（3 mmol·L-1，处理组）和不含GSH（对照组）的培养液中培养7 d，统计两组胚胎的卵裂率、桑椹胚率、囊胚率和囊胚总细胞数；并分别采用荧光染色法和液质联用技术（liquid chromatography mass spectrometry，LC/MS）对不同发育阶段的牛受精卵（受精后8、18、24、32 h）中GSH进行定量和跟踪分析，同时分析其中氧自由基（reactive oxygen species，ROS）的含量。另外，在受精卵培养液中添加GSH的同位素标记物（GSX），利用LC/MS检测受精卵及其培养液中GSX含量。结果表明：1）外源GSH可显著或极显著降低受精后18、24、32 h胚胎内ROS的含量（P<0.05，P<0.01）。2）处理组胚胎的桑椹胚率（58.67%vs. 48.46%）、囊胚率（50.83%vs. 34.88%）和囊胚总细胞数（102.26 vs. 76.27）显著高于对照组（P<0.05）。3）各发育阶段（受精后18、24、32 h）的处理组受精卵中，GSH的含量均显著高于对照组（P<0.05），且随发育进程而逐渐下降。4）外源GSX也显著提高了处理组受精卵（受精后18、24、32 h）中GSH含量（P<0.05），培养液中GSX的浓度则随培养时间的延长而持续下降。综上表明，外源GSH可清除胚胎内ROS，提高胚胎发育率和囊胚质量；LC/MS是定量分析胚胎内GSH及其同位素标记物的可靠方法，可用于外源GSH促进胚胎体外发育的机制研究。

关键词：

基金资助：中国农业科学院家畜胚胎工程与繁殖创新团队（ASTIP-IAS06-2018）