小鼠卵巢组织定量PCR分析中内参基因的筛选

来源：畜牧兽医学报杂志2019年第2期北京时间：

作者：杨显英, 熊显荣, 韩杰, 黄向月, 王艳, 阿果约达, 李键

单位：1. 西南民族大学生命科学与技术学院, 成都 610041;2. 青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室, 成都 610041

摘要：旨在选择小鼠卵巢组织中合适的内参基因，为研究卵巢发育过程中基因表达提供可靠数据。以不同年龄（0日龄、3周龄、5周龄、8周龄）小鼠卵巢组织为试验材料，Trizol法提取样本总RNA，并合成cDNA，根据已报道的小鼠（Mus musculus）各组织中相对稳定表达的8个常见内参基因（Gapdh、β-actin、β-tubulin、18S rRNA、16S rRNA、H2afz、Ubc、Rpl13a）的GenBank登录序列设计引物，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法构建卵巢cDNA等梯度（1：10）稀释后的标准曲线；利用geNorm分析候选内参基因的表达稳定性（M）；NormFinder筛选表达最稳定的内参基因；BestKeeper计算qRT-PCR结果的标准差（SD）和变异系数（CV），从而预测候选内参基因的稳定性。结果表明，8个内参基因的引物特异性较强，具有良好的线性关系；候选内参基因的表达稳定度排序：Gapdh=β-actin > 18S rRNA > Ubc > 16S rRNA > H2afz > Rpl13a > β-tubulin；其中 Gapdh表达稳定性最好，且标准差及方差系数最小（SD：0.32，CV：1.95），H2afz标准差及方差系数最大（SD>1.0，CV：5.76）。综上表明，本研究成功获得出生后小鼠卵巢发育过程中稳定表达的内参基因（Gapdh和β-actin），可作为其基因表达研究中的最佳候选内参。

关键词：

基金资助：四川省科技支撑计划（2017NZ0076）；牦牛遗传资源与保护创新团队（13CXTD01）