实时荧光定量RT-PCR检测牛库布病毒

来源：畜牧兽医学报杂志2020年第4期北京时间：

作者：李慧平, 汤承, 岳华

单位：1. 西南民族大学生命科学与技术学院, 成都 610041;2. 国家现代农业产业技术体系四川省兽药创新团队, 成都 610041

摘要：牛库布病毒（bovine kobuvirus，BKoV）可能是一个腹泻相关病原，目前还没有检测该病毒的实时荧光定量RT-PCR方法的报道。依据BKoV 3D核苷酸序列，采用Primer 6.0设计了一对引物，通过优化反应条件和反应体系，成功建立了检测BKoV的TB Green染料法实时荧光定量RT-PCR方法。结果显示此方法在4.86×108~4.86×102 copies·μL-1病毒浓度之间具有良好的线性关系，相关系数为0.999 5，扩增效率为92.75%；此方法只特异性检测BKoV，而与其他常见的腹泻病原没有交叉反应；组内及组间的变异系数均小于2%；最低检测下限为4.86×102 copies·μL-1。本研究所建的实时荧光定量RT-PCR方法对奶牛和牦牛腹泻粪便样本中BKoV的检出率明显高于已报道的3篇有关RT-PCR方法。对2018年5月-2019年5月采集自青藏高原地区（青海、西藏和四川藏区）的131份牦牛腹泻粪便样本进行检测，结果显示BKoV检出率为31.30%。首次成功建立了检测BKoV的实时荧光定量RT-PCR方法，具有良好的特异性和稳定性，且灵敏度高，为BKoV的检测及流行病学调查提供了一种新的技术手段；并且首次证实BKoV在牦牛中的流行，为牦牛腹泻的防控问题提供了参考。

关键词：牛库布病毒,实时荧光定量RT-PCR,牦牛,腹泻

基金资助：西南民族大学创新团队（2020NTD02）；西南民族大学研究生“创新型科研项目”（CX2018SZ30）