猪圆环病毒2型感染PK-15细胞中外泌体的鉴定及其对细胞增殖和凋亡的影响

来源：畜牧兽医学报杂志2020年第7期北京时间：

作者：陈洪博, 段滇宁, 胡瑶, 杨润泽, 洪麒翔, 李煜, 邱龙新, 杨小燕

单位：1. 龙岩学院生命科学学院, 龙岩 364012;2. 福建省预防兽医学与兽医生物技术重点实验室, 龙岩 364012

摘要：旨在分离感染PCV2的PK-15细胞分泌的外泌体，探讨其在PCV2感染淋巴细胞中的作用。提取PCV2感染PK-15细胞上清液中的外泌体，利用透射电镜观察外泌体形态、纳米颗粒跟踪分析测定外泌体粒径、Western blot检测外泌体标记蛋白分子（CD81、TSG101）；PKH67标记外泌体后检测细胞对外泌体的摄取；提取PCV2-外泌体基因组，检测PCV2 Rep和Cap基因；利用间接免疫荧光试验检测PCV2-外泌体感染PK-15细胞后PCV2病毒定位；通过绝对定量PCR检测PCV2-外泌体对淋巴细胞的感染率；利用CCK-8法检测淋巴细胞增殖；利用Annexin V-FITC/PI检测淋巴细胞凋亡率。透射电镜和外泌体粒径分析结果显示，PK-15细胞分泌的外泌体为双层膜的囊泡，直径30~200 nm；Western blot结果显示PK-15细胞分泌的外泌体存在特异性标记蛋白CD81和TSG101；外泌体摄取试验结果显示PCV2-外泌体能够被细胞摄取；PCR结果表明PCV2-外泌体基因组中含有PCV2 Rep和Cap基因；间接免疫荧光结果显示，与PCV2直接感染相比，PCV2-外泌体感染的淋巴细胞中，PCV2病毒拷贝显著升高，差异明显（P<0.01），外泌体裂解后感染淋巴细胞能力与PCV2病毒无显著差异；PCV2-外泌体可显著抑制淋巴细胞增殖（P<0.01或P<0.05）；PCV2-外泌体显著提高淋巴细胞凋亡率。PCV2感染PK-15细胞的外泌体中携带病毒基因，感染淋巴细胞后使细胞增殖降低和细胞凋亡增加。

关键词：外泌体,PCV2,淋巴细胞,细胞增殖,细胞凋亡

基金资助：福建省科技重大专项（2019NZ09005）；福建省自然科学基金（2018J01461；2019J01803）；福建省中青年教师教育科研项目（JAT160480）；龙岩市科技计划项目（2018LYF8012）；龙岩学院青年教师攀登项目（LQ2015028）