基于NS4蛋白的蓝舌病病毒间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用

来源：畜牧兽医学报杂志2020年第12期北京时间：

作者：易华山, 赵瑶, 马鲜平, 李欢, 夏宇, 朱文青, 刘倩如, 陈思倩, 曹慧贞, 姚婷, 高丽旭, 张金阳, 杨发挥, 魏晓蓉, 李前勇, 谢远兵

单位：1. 西南大学动物医学院, 重庆 402460;2. 昆明理工大学生命科学与技术学院, 昆明 650500;3. 重庆市荣昌区农业技术推广站, 重庆 402460;4. 重庆纳比威特检测技术服务有限公司, 重庆 402460;5. 重庆市永川区动物疫病预防控制中心, 重庆 402160

摘要：旨在建立蓝舌病病毒（BTV）血清学ELISA抗体检测方法，本研究以原核表达并纯化的BTV NS4重组蛋白为包被抗原，通过反应条件优化，建立了一种BTV重组NS4蛋白的间接ELISA抗体检测方法。SDS-PAGE结果显示，获得大小约52 ku的NS4重组融合蛋白，主要在上清中存在，Western blot显示，纯化后的重组蛋白具有良好的抗原性。通过方阵试验进行了ELISA反应条件优化，确定了重组蛋白抗原最佳包被量为3.0 μg·孔-1；血清最佳稀释倍数为1：200，酶标二抗最佳工作浓度为1：4 000，临界值分别为0.29和0.35。上述以NS4蛋白作为包被抗原建立的BTV抗体间接ELISA方法检测敏感性可达1：1 600；批内和批间重复性变异系数均小于10%；检测76份重庆地区牛群血清样品，阳性符合率为98%，阴性符合率为100%。本研究建立的间接ELISA方法为临床BTV血清抗体检测及BTV血清流行病学调查奠定了基础。

关键词：蓝舌病病毒,NS4基因,原核表达,间接ELISA

基金资助：重庆市基础研究与前沿探索专项项目基金（cstc2018jcyjAX0615）；中央高校基本科研业务专项基金（XDJK2018C059；XDJK2018C060）；国家重点研发计划项目（2018YFD0501705）