1种布鲁氏菌微滴式数字PCR检测方法的建立

来源：畜牧兽医学报杂志2021年第6期北京时间：

作者：梅力, 王英超, 程汝佳, 于国际, 范学政, 高晓龙, 高敏, 秦玉明, 李筱英, 李巧玲, 朱良全, 冯小宇

单位：1. 北京市动物疫病预防控制中心, 北京 102629;2. 中国兽医药品监察所, 北京 100081

摘要：本研究旨在构建1种布鲁氏菌（Brucella）微滴式数字PCR方法（droplet digital PCR，ddPCR）。以布鲁氏菌BCSP31基因为靶基因，选取保守区域设计引物和探针，构建了布鲁氏菌微滴式数字PCR方法。然后优化了ddPCR反应中的引物、探针浓度及退火温度，并进行方法的灵敏度、特异性和重复性试验。结果表明，ddPCR的最佳引物和探针浓度分别为900 nmol·L-1和250 nmol·L-1，最佳的退火温度为58℃。ddPCR的线性良好，最低检测下限为1.12 copies·μL-1，与大肠杆菌O：157菌株等其他4种细菌无交叉反应，而且批内重复性和批间重复性都较好。综上表明，本研究建立的ddPCR方法灵敏度高、特异性强，可对布鲁氏菌感染的临床样品进行定量检测。

关键词：布鲁氏菌,数字PCR,检测方法

基金资助：新疆生产建设兵团重大科技项目（2017AA003）；奶牛产业技术体系北京市创新团队项目（BAIC06-2021）