检测产单核细胞李氏杆菌溶血素的胶体金试纸条制备及初步应用

来源：畜牧兽医学报杂志2022年第6期北京时间：

作者：江玲丽, 高有领, 胡兴娟, 章先, 杨云凯, 魏华, 方维焕

单位：1. 宁波卫生职业技术学院，宁波 315100;2. 浙江万里学院，宁波 315100;3. 舟山海关综合技术服务中心，舟山 316021;4. 浙江大学动物预防医学研究所，杭州 310058

摘要：产单核细胞李氏杆菌为重要的食源性病原菌，本研究旨在建立快速、灵敏、特异的检测方法，提高检测效率和检测通量。李氏杆菌溶血素(LLO)蛋白经原核表达后, 制备单克隆抗体, 测定单克隆抗体的亚型、效价及亲和力。柠檬酸钠法研制LLO胶体金试纸条，并对试纸条的特异性、敏感性、重复性、稳定性及模拟样品进行检测，并初步应用于实际海产品的检测。结果发现，制备的LLO单克隆抗体特异性强、稳定性高、重复性佳、灵敏度较高，亲和力好，亲和力常数为4.25×108 L·mol－1。人工污染样品试验表明灵敏度与纯细菌培养物基本一致，为3.0×105CFU·mL-1。将LLO胶体金试纸条应用于500份海产品的实际检测中，产单核细胞李氏杆菌的阳性检出率为2.20% (11/500)，略低于国标检测方法(GB4789.30—2010)的2.40%(12/500)和PCR检测方法的2.40%(12/500)，三者之间符合率为91.67%。另外缩短检测时间至15 min，检测效率大幅度提高。本研究建立的LLO胶体金检测方法可用于产单核细胞李氏杆菌的快速检测。

关键词：产单核细胞李氏杆菌,李氏杆菌溶血素,单克隆抗体,胶体金试纸,海产品初步应用

基金资助：浙江省自然科学基金项目(LY19C180001)；浙江省科技厅公益技术研究农业项目(2014C32047)