非洲猪瘟病毒p54蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定

来源：畜牧兽医学报杂志2023年第1期北京时间：

作者：齐艳丽, 刘桃雪, 于海深, 张超, 鲁维飞, 王江, 褚贝贝, 张改平

单位：1. 河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室, 郑州 450046;2. 河南农业大学河南省动物生长发育调控重点实验室, 郑州 450046;3. 河南农业大学动物免疫学国际联合研究中心, 郑州 450046

摘要：旨在制备非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白的特异性单克隆抗体。本研究利用大肠杆菌表达系统表达p54蛋白，免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合。利用纯化的p54蛋白作为包被抗原，采用间接ELISA方法筛选获得阳性杂交瘤细胞。经4次亚克隆后，取杂交瘤细胞上清进行单克隆抗体亚型鉴定，利用体内诱生法制备单克隆抗体并进行纯化。间接ELISA方法检测单克隆抗体的效价，利用交叉反应性试验、间接免疫荧光试验和蛋白印迹对所获单克隆抗体的特异性进行鉴定。根据预测的p54蛋白二级结构，采用逐步截短法分析鉴定单克隆抗体识别的抗原表位区域，并在p54的三级结构中进行标注。结果显示：成功筛选了6株分泌p54单克隆抗体的杂交瘤细胞，分别命名为28G12-1、31G7-1、31G7-2、35F10-1、35F10-2、38D3-1。其中28G12-1、31G7-1、31G7-2重链为IgG2a型，35F10-1、35F10-2、38D3-1重链为IgG1型；轻链均为κ链。单克隆抗体的最低效价为1∶25600，与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪流行性腹泻病毒、猪细小病毒、猪急性腹泻综合征冠状病毒、猪圆环病毒2型不发生交叉反应，特异性强，所获抗体均识别p54蛋白C端127—146aa肽段。本研究成功获得了ASFV p54蛋白和p54单克隆抗体，并鉴定了6株单克隆抗体的抗原表位，为p54蛋白功能研究和ASFV新型表位疫苗研究奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒,p54蛋白,原核表达,单克隆抗体,间接ELISA,抗原表位

基金资助：国家自然科学基金(31941001)；河南省教学改革研究项目(2021SJGLX351)