猪传染性胃肠炎病毒荧光RT-RAA方法的建立及初步应用

来源：畜牧兽医学报杂志2023年第5期北京时间：

作者：吕荞, 赵钟毅, 尹德玮, 刘宇梦, 汪伟, 郑敏, 胡诗悦, 赵宸辰, 张昕宇, 雷晓哓, 陆景仪, 孙文超, 兰添

单位：1. 温州大学病毒学研究所温州市病毒学与免疫学重点实验室, 温州 325035;2. 广西大学动物科学技术学院, 南宁 530003;3. 广西动物疫病预防控制中心, 南宁 530004;4. 长春市动物疫病预防控制中心, 长春 130061

摘要：旨在建立一种简便、高效的猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的检测方法。本研究针对TGEV N基因设计了特异性的引物和探针,并构建重组质粒标准品TGEV-N,经过筛选及优化后建立TGEV荧光逆转录重组酶介异等温扩增(reverse-transcription recombinase-aid amplification,RT-RAA)检测方法。结果显示,该方法在42 ℃恒温条件下进行,20 min即可完成检测,与猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪丁型冠状病毒、猪肠道α冠状病毒等猪源病毒均无交叉反应;将TGEV-N稀释后,以100~106拷贝·μL-1作为模板,进行敏感性试验,结果表明,该方法最低检出限可以达到6.62×101拷贝·μL-1;采用该方法对50份猪源样品进行检测,阳性率为6%(3/50),检测结果与RT-PCR一致。本试验建立的TGEV荧光RT-RAA检测方法简便、高效、特异、灵敏,为TGEV的临床筛查提供可行技术。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒,荧光RT-RAA,临床检测

基金资助：温州市基础性科研项目(N20190005;N20180010)