牛病毒性腹泻病毒LAMP-LFD检测方法的建立及初步应用

来源：畜牧兽医学报杂志2023年第11期北京时间：

作者：郑如雯, 黄涛, 吴道义, 禹光美, 李芳芳, 隋鑫, 闵婷玉

单位：1. 贵州大学动物科学学院, 贵阳 550025;2. 毕节市畜牧兽医科学研究所, 毕节 551700

摘要：旨在建立一种用于牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的特异、灵敏、快速、简便的检测方法。试验利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification LAMP)与横向流动层析试纸(lateral flow dipstick,LFD)相结合的技术,根据BVDV 5'UTR序列保守区段设计4条LAMP特异性引物和1条异硫氰酸荧光素标记的DNA探针,再利用LFD检测扩增产物。通过对反应温度、反应时间、内外引物浓度比、Bst DNA 2.0聚合酶浓度、dNTP Mix浓度、Mg2+浓度等优化后对该方法的特异性及检测灵敏度进行分析并对52份临床样本进行检测,建立了检测BVDV的LAMP-LFD方法。结果显示:LAMP-LFD可特异性检测BVDV,而口蹄疫病毒、牛流行热病毒、牛疱疹病毒1型等均未检出。LAMP-LFD的敏感性较高,对pUC57-5'UTR质粒最低检测浓度为1.9×101 拷贝·μL-1。LAMP-LFD与PCR两种检测方法均检测出5份阳性,符合率为100%。本试验成功建立了用于BVDV快速检测的LAMP-LFD方法,该检测方法检测时间短,特异性强,操作简单,灵敏性高,可作为一种新型检测方法应用于基层检测。

关键词：传染病,牛病毒性腹泻病毒,环介导等温扩增技术,横向流动试纸条

基金资助：青年教师国家自然科学基金培育项目建议资助项目(黔科合平台人才[2017]5788-70);贵州大学引进人才科研项目(贵大人基合字[2015]33);贵州省科技计划项目(黔科合支撑[2018]2265);贵州省2016年科学技术基金(黔科合基础[2016]1048);贵州省科技计划项目(黔科合支撑[2021]一般153)