PEDV、PoRVA和PDCoV TaqMan三重RT-qPCR检测方法的建立与初步应用

来源：畜牧兽医学报杂志2024年第5期北京时间：

作者：胡泽奇, 李润成, 谭祖明, 谢秀艳, 王江平, 秦乐娟, 李荣, 葛猛

单位：1. 湖南农业大学动物医学院, 长沙 410000;2. 湖南龙华农牧发展有限公司, 茶陵 412400;3. 茶陵县畜牧水产事务中心, 茶陵 412400

摘要：旨在建立一种可快速同时检测猪流行性腹泻病毒 (porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、猪A群轮状病毒 (porcine rotavirus type A, PoRVA) 和猪丁型冠状病毒 (porcine deltacoronavirus, PDCoV) 三重荧光定量PCR方法。针对PEDV-N、PoRVA-VP6和PDCoV-M基因设计了引物和探针，条件优化后进行性能评估，并与商品化试剂盒检测对比。结果显示：本研究建立的三重RT-qPCR方法具有良好特异性，对PRRSV、PCV2和PRV等阳性核酸不发生扩增；具有较高的敏感性，PEDV、PoRVA和PDCoV的最低检测限均达1 copies·μL-1；重复性良好，组内和组间变异系数均小于1%；样本适应性广，检测不同样本类型时，变异系数均小于1%。与商品化试剂盒对比，本研究建立的方法PEDV和PoRVA的检测符合率为92.5%和97.5%，并对PDCoV的检测范围更广，对其变异毒株仍有较好的检测效果。本研究建立的检测方法具有特异性好、敏感性高、稳定性强和样本适应性广等优势，为临床腹泻样本提供了一种好的检测方法。

关键词：猪流行性腹泻病毒,猪A群轮状病毒,猪丁型冠状病毒,三重RT-qPCR

基金资助：湖南省重点研发计划项目(2023NK2017);云南省重大科技专项计划(202202AE090032); 湖南省教育厅重点项目(21A0125)；湖南省普通高等学校科技创新团队支持计划资助